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【摘要】 目的：探讨gpc3/mxr7基因在原发性肝癌及其他肿瘤组织中的表达。方法：收集2013年2月-2014年12月笔者所在医院诊断为原发性肝癌的患者作为本次研究对象，定义为研究组。对照组为同期来笔者所在医院诊断为其他类型肿瘤的患者。对比研究组和对照组gpc3/mxr7基因表达阳性率。比较研究组中不同病理类型患者的gpc3/mxr7基因表达阳性率。结果：研究组和对照组gpc3/mxr7基因表达阳性率分别为74%、15%，差异有统计学意义（P<0.05）。AFP大于40 μg/μl者、肿瘤>5 cm者、Ⅲ～Ⅳ病理分级者的gpc3/mxr7基因表达阳性率明显高于AFP<40 μg/μl者、肿瘤<5 cm者、Ⅰ～Ⅱ的病理分级者。结论：本次研究认为Glypcian3/mxr7基因在肝癌中的表达阳性率明显高于其他肿瘤组织，可将Glypcian3/mxr7基因用于肝癌的早期临床诊断。
【关键词】 gpc3/mxr7基因； 原发性肝癌； 表达
中图分类号 R735.7 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）18-0147-02
doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.18.084
gpc3/mxr7基因在成人的肺、肾脏中较低的表达，在肝、心、脑等组织中均不表达。目前研究发现gpc3/mxr7基因表达的肝癌细胞中转录水平呈显著增高，还有研究认为gpc3/mxr7基因是肝癌特异性高表达基因[1-2]。因此笔者拟收集2013年2月-2014年12月笔者所在医院诊断为原发性肝癌的患者，探讨gpc3/mxr7基因在原发性肝癌及其他肿瘤组织中的表达差异。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2013年2月-2014年12月笔者所在医院诊断为原发性肝癌的患者100例作为本次研究对象，定义为研究组。对照组为同期来笔者所在医院诊断为其他类型肿瘤的患者100例，分别为乳腺癌、大肠癌、肺癌、胰腺癌等。研究组男45例，女55例，平均年龄（49.5±12.8）岁；对照组男48例，女52例；平均年龄（50.3±11.7）岁，两组患者性别、年龄比较差异均无统计学意义（P>0.05）。具有可比性。入选标准：（1）年龄18～60周岁。（2）患者入院后通过手术，有明确的病理标准诊断为原发性肝癌。（3）自愿参加试验，签订知情同意书。
1.2 评价方法
对比研究组和对照组gpc3/mxr7基因表达阳性率。比较研究组中不同病理类型患者的gpc3/mxr7基因表达阳性率。
1.3 研究方法
1.3.1 载体与试剂 pBskII克隆载体及其宿主菌XL-1 blue。限制性内切酶，T4-DNA-连接酶、Trizol，逆转录酶、Taq-DNA-合成酶、α-P32-dCTP。
1.3.2 寡核苷酸引物 利用引物合成软件primer设计出gpc3/mxr7基因引物序列。上游引物P1：5"GCGAATTCTCCCTGCGAAGCAGGATG3"；下游引物P2：5"CGCTCGAGTCAGTGCACCAGGAA-GAA3"。在基因的两端分别加上EcoRI和XhoI酶切位点。
1.3.3 逆转录合成cDNA第一链及PCR反应 以抽提的肝癌组织总RNA为模板，Oligo（dT16）为引物合成cDNA第一条链，合成按照逆转录酶AMV说明书操作。PCR反应在PE公司PCR仪中扩增，1%凝胶电泳检测特异条带，Qiagen公司胶回收纯化试剂盒纯化基因片段。
1.3.4 DNA重组与鉴定 将gpc3/mxr7基因全长读码序列克隆至pBSKII载体中，按分子克隆操作，用EcoRI和Xhol酶切鉴定。DNA序列分析在ABI377型测序仪上完成（上海南方基因组合作完成）。
1.3.5 Northern杂交检测 pBSKII-gpc3质粒用EcpRI和XhoI酶切后，纯化基因片段，用随机引物法进行α-P32-dCTP标记。FU-JI2000生物影像分析系统对杂交结果进行分析。
1.4 统计学处理
将资料录入 Econometrics Views 6.0统计软件，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 研究组和对照组gpc3/mxr7基因表达阳性率比较
研究组和对照组gpc3/mxr7基因表达阳性分别为74例（74%）、15例（15%），差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2 研究组中不同病理类型患者的gpc3/mxr7基因表达阳性率比较
AFP>40 μg/μl者、肿瘤>5 cm者、Ⅲ～Ⅳ病理分级者的gpc3/mxr7基因表达阳性率明显高于AFP<40 μg/μl者、肿瘤<5 cm者、Ⅰ～Ⅱ的病理分级者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
表1 研究组中不同病理类型患者的gpc3/mxr7基因表达阳性率比较
项目例数（例）阳性率（%）P值
AFP>40 μg/μl7272<0.05
<40 μg/μl2828
肿瘤大小>5 cm7474<0.05
<5 cm2626
病理分级Ⅰ～Ⅱ级3333<0.05
Ⅲ～Ⅳ级6767
3 讨论
3.1 gpc3/mxr7基因与肝癌的关系
Glypcian3/mxr7基因国外学者在原发性肝癌组织中分离到的一种特异性表达片段[3]。Glypcian3/mxr7基因可被核受体超家族的G蛋白偶联受体激活。酶联免疫分析法和免疫组化法均可检测到原发性肝癌组织中有Glypcian3/mxr7基因的表达，但正常肝细胞中却没有表达[4]。有研究指出Glypcian3/mxr7基因阳性的多见肝细胞性肝癌和肝内胆管性肝癌中，而混合性肝癌中较少表达。还有学者在矫正了年龄、性别、肝癌分化类型等因素的差异后，Glypcian3/mxr7基因阳性表达是肝癌患者预后不良的独立危险因素。还有研究指出Glypcian3/mxr7基因阳性患者的5年生存率明显低于Glypcian3/mxr7基因阴性的患者[5]。对于Glypcian3/mxr7基因在男性和女性肝癌患者中的差异，有研究指出分析了250余例男性、女性肝癌患者细胞中的Glypcian3/mxr7基因表达，结果发现男性和女性的Glypcian3/mxr7基因阳性率分别为32%和35%，差异无统计学意义。此外gpc3/mxr7基因能够促进肝癌细胞的生长，有学者进行过统计，当gpc3/mxr7基因阳性率每升高10%，则可以让肝癌细胞的生长速度增加5%左右[6]。
3.2 Glypcian3/mxr7基因在其他肿瘤组织中的表达
有学者发现Glypcian3/mxr7基因在胃癌组织中也有不同程度的表达[7]。与肝细胞癌的表达途径不同，Glypcian3/mxr7基因是通过甾体激素核受体超家族来特异性激活胃癌细胞。在1983年，国外学者首次在胃癌组织中发现Glypcian3/mxr7基因的表达，但阳性率仅为2.4%～3.8%[8]。1992年，有学者使用ELISA法对100例大肠癌患者的标本进行检测，结果Glypcian3/mxr7基因阳性率仅为5.1% 。还有研究认为Glypcian3/mxr7基因表达与肿瘤部位、浸润深度和组织类型多无相关，而Glypcian3/mxr7基因阳性多见于胃癌中分化不良的低分化癌、印戒细胞癌和未分化癌[5]。有学者认为认为Glypcian3/mxr7基因阳性与卵巢和子宫颈转移潜能有关。此外还有研究指出Glypcian3/mxr7基因阳性表达在癌旁组织高于癌组织，推测这与PRmRNA异构体与肿瘤的发展有密切关系。
综上所述，Glypcian3/mxr7基因在肝癌中的表达阳性率明显高于其他肿瘤组织，可将Glypcian3/mxr7基因用于肝癌的早期临床诊断。
参考文献
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（收稿日期：2015-02-18） （编辑：金燕）